您当前的位置:365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单资讯 > 法规标准

高效液相色谱-串联质谱法测定中药口服液中23种防腐剂

嘉峪365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单网????????2019-10-22 10:07

摘要:

目的:建立同时测定中药口服液产品中苯甲酸、山梨酸、三氯卡班、4-羟基苯甲酸丙酯、4-羟基苯甲酸异丙酯等23种防腐剂的的高效液相色谱-串联质谱365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单方法。

方法:样品以甲醇为提取溶剂进行超声提取,离心后取上清液以Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)进行分离,0.01 mol·L-1醋酸铵溶液和甲醇为流动相梯度洗脱;流速为0.4 mL·min-1。结果:在相应的浓度范围内,23种防腐剂质量浓度与峰面积呈良好的线性关系(r≥0.99);365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单下限在1~40 ng·mL-1间;平均回收率范围为75.1%~115.0%,日内精密度为0.92%~3.3%。

结论:该方法分析速度快,准确度好,灵敏度高,可用于中药口服液中防腐剂的快速筛查。

?

防腐剂具有防腐、抑菌杀菌、延长保质期的作用,中药口服液中添加防腐剂是为了在生产、使用和保存过程中免受致病性和非致病性微生物污染。防腐剂种类繁多,中药口服液中最常使用的防腐剂有山梨酸、苯甲醇、异噻唑啉酮类、尼铂金类、苯扎氯铵类等。关于防腐剂的365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单研究主要集中在化妆品、食品和工业产品领域中,中药口服液中防腐剂的研究报道较少[1-3]。目前,防腐剂的测定方法主要有气相色谱法[4]、毛细管电泳法[5]、液相色谱法[6]、离子色谱法[7]和气相色谱-质谱法[8]等,色谱法采用保留时间和光谱进行定性,无法排除基质干扰带来的色谱峰分离不完全问题,不可避免会出现假阴性、假阳性的情况。建立中药口服液中防腐剂高通量筛查方法,可快速、准确地反映产品中防腐剂的实际添加情况,为药品监管提供有力的技术支持。

?

本研究以中药口服液中常用防腐剂为研究对象,采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS)技术,建立同时365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单23种防腐剂的高通量筛查方法。该方法灵敏度高,准确性好,可用于中药口服液中防腐剂的快速筛查[9-11]。

?

1 仪器与试药?

?

Agilent 1290 Infinity超高压液相色谱仪(6490 Triple Quad LC/MS、ESI源),安捷伦公司;ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm),Waters公司;Milli-Q超纯水器,Millipore公司;Satorius CP225D十万分之一电子天平,赛多利斯公司;KQ-500DE型数控超声仪,昆山市超声仪器有限公司。

?

对照品:苄索氯铵(TRC公司,批号7-SXG-117-1,纯度96%),十四烷基二甲基苄基氯化铵(Aladdin公司,批号H1330003,纯度98.0%),十六烷基二甲基苄基氯化铵(Aladdin公司,批号K1504017,纯度95%),氯咪巴唑(TCI公司提供,批号XQGKB,纯度99.9%),碘丙炔醇丁基氨甲酸酯(源叶生物公司,批号MFCD00072438,纯度98.0%),甲基异噻唑啉酮(Dr.Ehrenstorfer GmbH公司,批号G121713,纯度97.0%),甲基氯异噻唑啉酮(Dr.Ehrenstorfer GmbH公司,批号125746,纯度99.0%),2-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇(曼哈格公司,批号160617,纯度99.1%),邻苯基苯酚(Dr.Ehrensorfer公司,批号F2225S,纯度96.8%),4-羟基苯甲酸(上海安谱科学仪器有限公司,批号Q2080050,纯度99.9%),4-羟基苯甲酸丙酯(Acros Organics公司,批号A0274298,纯度99.5%),4-羟基苯甲酸异丙酯(TCI公司,批号NTQUC-WQ,纯度99.8%),4-羟基苯甲酸异丁酯(TCI公司,批号AGN01-GUWT,纯度99%),4-羟基苯甲酸丁酯(Acros Organics公司,批号A0270136,纯度99.9%),4-羟基苯甲酸乙酯(曼哈格公司,批号160706,纯度99.9%),4-羟基苯甲酸甲酯(Acros Organics公司,批号A0257407,纯度99%),苯甲酸(Acros Organics公司,批号A0280404,纯度99.6%),溴氯芬(曼哈格公司,批号185934,纯度100%),氯二甲酚(曼哈格公司,批号170345,纯度98.5%),苄氯酚(Aladdin公司,批号EK2308,纯度97.5%),对氯间甲酚(曼哈格公司,批号1603652,纯度98.0%),三氯卡班(Dr.Ehrensorfer公司,批号30729,纯度99%),山梨酸(Accu Standard公司,批号22821,纯度99%)。

?

甲醇、乙腈、甲酸、醋酸铵均为色谱纯;空白基质,市售口服液,经365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单不含上述23种防腐剂。

?

2 方法[12-13]?

?

2.1 色谱条件?

色谱柱:Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm,十八烷基硅烷键合硅胶);流动相:溶液A为0.01mol·L-1醋酸铵-水溶液,溶液B为甲醇,梯度洗脱,程序见表 1、2;流速:0.4 mL·min-1;柱温:30 ℃;进样量:2 μL。

?

高效液相色谱-串联质谱法测定中药口服液中23种防腐剂

?

高效液相色谱-串联质谱法测定中药口服液中23种防腐剂

?

2.2 质谱条件?

离子源:电喷雾离子源(ESI源);雾化气流速:172 kPa;干燥气流速:14 L·min-1;碰撞气(Ar)流速:230 kPa;鞘气加热温度:200 ℃;气体温度:180 ℃;离子化电压:3 000 V(负离子模式),3 500 V(正离子模式);监测模式:正、负离子多离子反应监测模式,监测离子对及其他相关参数信息见表 3。

?

高效液相色谱-串联质谱法测定中药口服液中23种防腐剂

?

2.3 对照品溶液的制备?

分别精密称取23种防腐剂对照品20 mg(必要时需折算),精确到0.000 1 g,分别置20 mL量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,制得各单一成分对照品储备液。准确移取各对照品储备液适量,用0.2%甲酸-甲醇溶液稀释并定容,作为混合对照品储备液,质量浓度见表 4。

?

高效液相色谱-串联质谱法测定中药口服液中23种防腐剂

高效液相色谱-串联质谱法测定中药口服液中23种防腐剂

?

2.4 供试品溶液的制备?

精确量取供试品1.0 mL,置100 mL量瓶中,加甲醇60 mL,超声(功率500 W,频率40 kHz)提取15 min,取出,放冷至室温后,用甲醇定容至刻度,摇匀,4 500 r·min-1离心5 min,上清液经0.45 μm微孔滤膜过滤,滤液供高效液相色谱-串联质谱仪测定。

?

3 结果与讨论?

3.1 线性范围及365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单下限?

取混合对照品储备溶液适量,用0.2%甲酸-甲醇溶液稀释得系列浓度对照品溶液,进样测定,考察各成分定量离子峰面积对应浓度的线性相关性。结果在本方法条件下,甲基异噻唑啉酮等23种组分的365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单响应值与样品中被测物质浓度在相对应的范围内线性相关性良好(r≥0.99);取空白基质进行低浓度水平的添加,测定信噪比,以信噪比为3:1计算365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单下限,结果23种防腐剂的365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单下限均 < 0.001%,详见表 5。

?

高效液相色谱-串联质谱法测定中药口服液中23种防腐剂

高效液相色谱-串联质谱法测定中药口服液中23种防腐剂

高效液相色谱-串联质谱法测定中药口服液中23种防腐剂

?

3.2 回收率试验及精密度?

精确量取空白基质18份,分别添加低、中、高3种不同浓度的对照品储备液,按本法处理后测定,计算各防腐剂组份的平均回收率,结果不同浓度添加水平的回收率为75.1%~115.0%;日内精密度为0.92%~3.3%,见表 6。

?

高效液相色谱-串联质谱法测定中药口服液中23种防腐剂

高效液相色谱-串联质谱法测定中药口服液中23种防腐剂

?

3.3 方法特异性?

取市售经检查不含上述23种防腐剂的口服液作为空白基质,考察了口服液空白基质和添加甲基异噻唑啉酮等23种组分后的色谱图和质谱图。结果如图 1~3所示,表明口服液基质中存在的物质对本方法目标365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单物质基本没有干扰。

?

高效液相色谱-串联质谱法测定中药口服液中23种防腐剂

A.正离子模式(positive ion mode) B.负离子模式(negative ion mode)

图 1 空白基质定量离子对色谱图

Fig.1 Quantitative ion pair chromatograms of blank matrix

?

1.对羟基苯甲酸(phydroxybenzoic acid) 2.苯甲酸(benzoic acid) 3. 2-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇(2-bromo-2-nitropropane-1,3-diol) 4. 4-羟基苯甲酸甲酯(methyl 4-hydroxybenzoate) 5. 4-羟基苯甲酸乙酯(ethyl 4-hydroxybenzoate) 6.对氯间甲酚(p-chlorocresol) 7.邻苯基苯酚(o-phenylphenol) 8.氯二甲酚(chloro two creso) 9. 4-羟基苯甲酸异丙酯(isopropyl 4-hydroxybenzoate) 10. 4-羟基苯甲酸丙酯(propyl 4-hydroxybenzoate) 11. 4-羟基苯甲酸异丁酯(isobutyl 4-hydroxybenzoate) 12. 4-羟基苯甲酸丁酯(butyl 4-hydroxybenzoate) 13.苄氯酚(benzyl chlorophenol) 14.三氯卡班(triclocarban) 15.溴氯芬(bromo chlorifen)

?

?

高效液相色谱-串联质谱法测定中药口服液中23种防腐剂

图 2 空白基质加标定量离子对色谱图(负离子模式)

Fig.2 Quantitative ion pair chromatograms of blank matrix added with standards(negative ion mode)

??

16.甲基异噻唑啉酮(methy lisothiazolinone) 17.甲基氯异噻唑啉酮(methyl chloroisothiazolone) 18.碘丙炔醇丁基氨甲酸酯(iodopropynol butyl carbamate) 19.山梨酸(sorbic acid) 20.氯米巴唑(climopazol) 21.苄索氯铵(benzethonium chloride) 22.十四烷基二甲基苄基氯化铵(tetradecyl dimethyl benzyl ammonium chloride) 23.十六烷基二甲基苄基氯化铵(cetalkonium chloride)

?

?

高效液相色谱-串联质谱法测定中药口服液中23种防腐剂

图 3 空白基质加标定量离子对色谱图(正离子模式)

Fig.3 Quantitative ion pair chromatogram of blank matrix added with standards(positive ion mode)

?

3.4 样品测定?

对市售45批中药口服液样品进行365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单,结果60%的样品中检出防腐剂,其中10批检出山梨酸,检出量为0.003 0~0.50 g·L-1;14批检出苯甲酸,检出量为0.005 9~0.55 g·L-1;3批检出4-羟基苯甲酸甲酯,检出量为0.01~0.12 g·L-1。经与标签和说明书核对,12批检出防腐剂的样品未标识添加上述防腐剂,防腐剂的实际检出情况与标签标识不一致比例高达44%。

?

4 结论?

本研究以中药口服液中限用防腐剂名单为基础,按防腐剂的特点进行分类测定,一些沸点低易挥发的物质并有文献报道的如苯甲醇、苯氧乙醇、三氯叔丁醇、二氯苯甲醇归为气相色谱-质谱联用法范畴,其余23种采用液相色谱-质谱法测定。通过液相色谱-质谱条件的摸索,初步确定该23种组分适用于高相液相-质谱联用法365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单[14-15]。经验证,建立的测定方法的线性关系良好,回收率在80%~110%之间,方法365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单下限能满足使用要求。

?

该方法覆盖了常用防腐剂品种,解决了目前中药口服液中防腐剂检验方法不完善、无质谱验证方法的缺陷,可广泛适用于防腐剂的快速筛查。

?

参考文献

[1] 韩晓萍, 李亚楠, 周霈. 高效液相色谱法同时测定化妆品中的12种防腐剂[J]. 日用化学工业, 2018, 48(3): 178.

HAN XP, LI YN, ZHOU P. Simultaneous determination of 12 kinds of preservatives in cosmetics by high performance liquid chromatography[J]. China Surfactant Deterg Cosmet, 2018, 48(3): 178.??

[2] 谭建林, 冯雷, 俸金梅, 等. 高效液相色谱法同时测定食品中12种防腐剂和甜味剂[J]. 食品安全质量365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单学报, 2016, 7(10): 4101.

TAN JL, FENG L, FENG JM, et al. Simultaneous determination of 12 kinds of preservatives and sweeteners in food by high performance liquid chromatography[J]. J Food Safe Qual, 2016, 7(10): 4101.??

[3] 吕庆, 李海玉, 李丕, 等. 气相色谱-串联质谱法测定木制儿童用品中的10种木材防腐剂[J]. 质谱学报, 2013, 34(6): 321.

Lü Q, LI HY, LI P. Simultaneous determination of 10 preservatives in wooden children's products by gas chromatography-tandem mass spectrometry[J]. J Chin Mass Spectr Soc, 2013, 34(6): 321.??

[4] 周家萍, 李典, 李治东, 等. 气相色谱法同时测定食品中8种防腐剂[J]. 食品研究与开发, 2017, 38(14): 161.

ZHOU JP, LI D, LI ZD, et al. Simultaneous determination of 8 preservatives in foods by gas chromatography[J]. Food Res Dev, 2017, 38(14): 161. DOI:10.3969/j.issn.1005-6521.2017.14.034??

[5] 王钰, 杨思文, 代语林, 等. 毛细管电泳法分离365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单饮料中的防腐剂[J]. 中国酿造, 2014, 33(4): 125.

WANG Y, YANG SW, DAI YL, et al. Separation and detection of preservatives in beverage by capillary electrophoresis[J]. Chin Brew, 2014, 33(4): 125.??

[6] 陆启春. HPLC法同时测定盐酸西替利嗪和5种防腐剂的含量[J]. 药学研究, 2018, 37(3): 152.

LU QC. Simultaneous determination of cetirizine hydrochloride and 5 preservatives by HPLC[J]. J Pharm Res, 2018, 37(3): 152.??

[7] 解彦平, 胡平, 李丽敏. 葡萄酒中甜味剂和防腐剂离子色谱多组分测定[J]. 医学动物防制, 2016, 32(1): 108.

XIE JP, HU P, LI LM. Sweetening and preservatives in wine IC of multi-component determination[J]. J Med Pest Control, 2016, 32(1): 108.??

[8] 刘运明, 周长美, 姜新. 固相萃取-凝胶渗透色谱净化-气相色谱-质谱法测定番茄红素软胶囊中6种对羟基苯甲酸酯类防腐剂[J]. 中国卫生检验杂志, 2015, 25(20): 3471.

LIU YM, ZHOU CM, JIANG X. Determination of 6 para-hydroxybenzoic acid esters in health food lycopene soft capsule by solid phase extraction-gel permeation chromatography purification-gas chromatography-mass spectrometry[J]. Chin J Health Lab Technol, 2015, 25(20): 3471.??

[9] 张丽, 董丽君, 伦才智, 等. 液相色谱-串联质谱法测定木材及木制品中3种异噻唑啉酮类防腐剂[J]. 湖北林业科技, 2016, 45(3): 45.

ZHANG L, DONG LJ, LUN ZC, et al. Determination of three isothiazolinong preservatives in wood and wood products using liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Hubei Sci Technol, 2016, 45(3): 45. DOI:10.3969/j.issn.1004-3020.2016.03.014??

[10] 郑荣, 茹歌, 王柯. 高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中16种防腐剂[J]. 中国卫生检验杂志, 2016, 26(19): 2758.

ZHENG R, RU G, WANG K. Simultaneous determination of 16 preservatives in cosmetics by liquid chromatography tandem mass spectrometry[J]. Chin J Health Lab Technol, 2016, 26(19): 2758.??

[11] 赵艳菊, 杨晋青, 聂磊, 等. 液相色谱-串联质谱法测定肉鱼禽产品中的防腐剂月桂酰精氨酸乙酯盐酸盐[J]. 食品安全质量365体育作弊吧_365 体育怎样的是真的_365体育自动取消订单学报, 2017, 8(4): 1455.

ZHAO YJ, YANG JQ, NIE L, et al. Determination of ethyl lauroyl arginate hydrochloride in meat, fish and poultry products by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. J Food Safe Qual, 2017, 8(4): 1455.??

[12] 王素娟, 段海波, 秦云华, 等. 超高效液相色谱-串联质谱法同时测定食用香精香料中的1种甜味剂和6种防腐剂[J]. 化学研究与应用, 2018, 30(3): 415.

WANG SJ, DUAN HB, QIN YH, et al. Simultaneous determination of one sweetener and six preservatives in edible essences and spices by ultra performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry[J]. Chem Res Appl, 2018, 30(3): 415. DOI:10.3969/j.issn.1004-1656.2018.03.020??

[13] 罗艳, 涂晓琴, 钟庆元, 等. HPLC测定12种口服液类保健食品中的6种防腐剂[J]. 华西药学杂志, 2015, 30(3): 331.

LUO Y, TU XQ, ZHONG QY, et al. Determination of 6 kinds of preservatives in 12 kinds of oral-liquid health food by HPLC[J]. West Chin J Pharm Sci, 2015, 30(3): 331.??

[14] 王宏亮, 陈盼盼, 何计龙, 等. HPLC测定口服液体制剂中防腐剂和甜味剂的含量[J]. 中国现代应用药学, 2015, 32(7): 844.

WANG HL, CHEN PP, HE JL, et al. Content determination of preservatives and sweeteners in oral liquid preparations by HPLC[J]. Chin J Mod Appl Pharm, 2015, 32(7): 844.??

[15] 陈琪琪, 王惠娟, 茅力. 高效液相色谱法测定维生素E软胶囊中的9种对羟基苯甲酸酯类防腐剂[J]. 中国卫生检验杂志, 2015, 25(14): 2257.

CHEN QQ, WANG HJ, MAO L. Determination of 9 parabens preservatives in vitamin E soft capsules by HPLC[J]. Chin J Health Lab Technol, 2015, 25(14): 2257.??

?

作者:马传江

?

山东中医药大学附属医院, 济南 250012
分享到:

来源:Internet

周点击排行 月点击排行